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    小鼠尿肌酐(UCR )ELISA试剂盒

    实验类型: ELISA,酶联免疫吸附测定,双抗夹心法。
    检测范围: 0.75μmol/L~24μmol/L
    最低检测限: 0.1
    应用范围: 免疫学检验,血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本。

    用途
    该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中浓度。
     
     
    检测原理
    本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
     

    反应类型 夹心法
    规格 96T
    反应时间 4.5h
    反应性 通用
    检测方法 Colormetric
    灵敏度 检测下线除以10
    样本体积 100μL
    样本类型 血清、血浆或其他相关生物液体
    特异性 可检测样本中的指标,且与其它相关蛋白无明显交叉反应
    重复性 板内,板间变异系数均<10%
     
    样品活化方法
    生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测指标活性前必须进行活化处理。
    活化方法如下:
    血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
    注意:样品被稀释了10倍!
    细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
    注意:样品被稀释了2倍!
    组织匀浆:1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀后检测。
    注意:样品被稀释了50倍!
     
    精密度
    板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
      批内变异系数 批间变异系数
    样本 1 2 3 1 2 3
    数量 20 20 20 20 20 20
    平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL) 0.41 1.07 4.96 0.47 1.25 4.24
    标准差 0.02 0.05 0.22 0.03 0.06 0.2
    变异系数 (%) 4.88 4.67 4.43 6.38 4.8 4.72
     
    回收率
    分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
    样本类型 回收率范围 (%) 平均回收率 (%)
    血清(n=5) 94-110 102
    血浆(EDTA)(n=5) 90-102 96
    细胞上清(n=5) 95-106 98
     
    线性
    分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
        血清(n=5) 血浆(EDTA)(n=5) 细胞上清(n=5)
    1:2 回收率范围(%) 99-108 95-105 92-104
    平均回收率(%) 105 102 97
    1:4 回收率范围(%) 95-109 90-100 97-105
    平均回收率(%) 102 96 100
    1:8 回收率范围(%) 89-103 89-104 96-108
    平均回收率(%) 97 97 102
    1:16 回收率范围(%) 88-102 98-108 92-105
    平均回收率(%) 94 104 100
     
    试剂盒组成及保存
    未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
    试剂盒组成 48孔配置 96孔配置
    说明书 1份 1份
    封板膜 2片 2片
    密封袋 1个 1个
    酶标包被板 1×48 1×96
    标准品 0.3ml×6管 0.3ml×6管
    酶标试剂 5 ml×1瓶 10 ml×1瓶
    样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
    显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
    显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
    终止液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
    20×浓缩洗涤液 15ml×1瓶 25ml×1瓶
    试剂盒组成 48孔配置 96孔配置
    说明书 1份 1份
    封板膜 2片 2片
    密封袋 1个 1个

    说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
    试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。
     
     
    操作步骤
    1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
    2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
    4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
    5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
    6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
    8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
     
    试验所需自备物品
    1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
    2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
    3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
    4. 吸水纸
     

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    友情链接 elisa试剂盒

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